熒光分光光度計的原理和使用的注意事項

熒光分光光度計的原理和使用的注意事項

        熒光分光光度計是一種用于掃描液相熒光標記發出的熒光光譜的儀器。它可以提供包括激發光譜、發射光譜、熒光強度、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等多種物理參數，從各個角度反映分子的鍵合和結構。熒光分光光度計具有靈敏度高、選擇性強、樣品量小、方法簡單、工作曲線范圍寬等優點，可廣泛應用于生命科學、醫學、藥學和藥理學、有機無機化學等領域。
        熒光分光光度計的工作原理：
        光源的氙弧燈發出的光通過光切割器使其成為斷續光，激發光單色器變成單色光，該光為熒光物質 被測熒光物質在激發光下的激發光輻照通過單色器變成單色熒光，然后照射到供試品使用的光電倍增管上，其產生的光電流被放大器放大。輸入到記錄儀，激發光單色儀和熒光單色儀的光柵由電機驅動的凸輪控制。在繪制熒光發射光譜時，將激發光單色儀的光柵固定在最合適的激發光波長上。 轉動熒光單色儀的凸輪，將各波長的熒光強度信號輸出到記錄儀，記錄的光譜即為發射光譜，簡稱熒光光譜。
        熒光分光光度計測試注意事項：
         ①樣品應置于四面透光的石英比色皿（熒光池）中。如果是揮發性樣品，則應使用堵塞的熒光池。
         ②在熒光分析中，為了獲得穩定可靠的數據，一般需要預熱氙燈30分鐘左右。如果儀器的光源是閃爍的氙燈，預熱時間可以縮短到10分鐘左右。對于一些易對光敏感、易分解的熒光物質，盡量使用波長長、光強低、短時照明。
         ③溫度變化會引起熒光強度的變化。一般來說，降低溫度有利于提高熒光量子產率，增加熒光強度。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異。大多數熒光物質的熒光強度受溫度影響不大，測試溫度變化不超過±3℃，對測試結果幾乎沒有影響。
         ④當熒光物質為弱酸或弱堿時，溶液的pH值對熒光強度的影響很大。由于弱酸或弱堿處于不同的酸度，分子和離子的電離平衡會發生變化，熒光物質的熒光強度會因其解離狀態而發生變化。
         ⑤熒光物質分子與溶液中其他物質分子的相互作用導致熒光強度下降。常見的熒光猝滅劑，如鹵離子、重金屬離子、O2、硝化物質、重氮化合物等。溶液中溶解的氧也可使幾乎所有熒光物質產生不同程度的熒光消光。因此，在更嚴格的熒光實驗中必須去除 02。